热启动Taq DNA聚合酶(无外切酶活性)

中文名称：热启动Taq DNA聚合酶(无外切酶活性)
英文名称：
产品规格：250U|1000U|10000U
产品简介：
HotStart Taq DNA Polymerase(exo-)是一种创新型的抗体修饰的热启动酶。该聚合酶经基因工程改造去除了5’→3’外切酶活性。该酶在室温下活性被完全封闭，避免了在样品准备及第一循环反应升温阶段产生非特异性扩增和引物二聚体，增加了DNA扩增的特异性。加热到70℃时，结合在酶上的抗体迅速失活，且不会影响之后的Taq DNA聚合酶反应。
使用抗体的热启动法，与化学修饰热启动法不同，无需长时间的变性步骤，具有在第一循环的变性步骤中即可完全失活的优点，该酶具有特异性好、灵敏度高、重复性好、扩增效率高等优点。
单位定义：
75℃条件下，30分钟内将10 nmoL脱氧核糖核苷酸(dNTPs)合成多聚核苷酸所需的酶量定义为1个活性单位。
特点：
来源于重组表达，分子量：90kD；
无5’→3’和3’→5’外切酶活性。
失活或抑制：
1．低浓度的尿素、甲酰胺、二甲基甲酰胺(DMF)和二甲基亚砜(DMSO)对Taq DNA聚合酶的活性无抑制。
2．较高浓度的非离子表面活性剂如Tween-20、NP-40和Triton X-100(＞5%)能抑制Taq DNA聚合酶的活性。
3．极低浓度的离子表面活性剂如脱氧胆氨酸钠(＜0.06%)，十二烷基肌氨酸钠(＜0.02%)，十二烷基硫酸钠(SDS，＜0.01%)几乎完全抑制Taq DNA聚合酶活性。
4．酚/氯仿抽提可使Taq DNA聚合酶丧失活性。
操作说明：
1．PCR各组分在冰上完全融化并充分混匀，最后加入HotStart Taq DNA Polymerase(exo-)，以减少引物二聚体和非特异性条带的产生(加样操作均在冰上完成)。以50μL反应体系为例，按照下表进行加样：
组分 加入体积 终浓度
10×HotStart Standard Reaction Buffera 5 μL 1×(含2mM Mg2+)
10 mM dNTP 1 μL 0.2 mM
Primer F(10 μM) 1 μL 0.2 μM(0.05～1 μM)
Primer R(10 μM) 1 μL 0.2 μM(0.05～1 μM)
Template DNAb Variable ＜1 μg/50μL
HotStart Taq DNA polymerase(exo-，5U/μL) 0.25 μL 1.25 U/50μL
(0.25～2.5 U/50μL)
ddH2O Up to 50 μL
a. HotStart Taq DNA Polymerase(exo-) 的催化活性对Mg2+浓度非常敏感，Mg2+终浓度在2.0 mM时酶的催化活性最高。1×PCR反应液中包含2mM Mg2+，适当提高Mg2+浓度可以提高PCR产量，但过高的Mg2+浓度不但抑制酶的活性，还会增加错配几率。
b.不同类型的DNA模板，在50 μL反应体系中的推荐用量为：基因组DNA：10ng～1 μg；质粒DNA：1～30 ng。
2．推荐PCR程序如下表：
步骤 温度 时间 循环数
预变性a 95℃ 5 min 1
变性 95℃ 15-30 s 25～40
退火b 45～68℃ 15-60 s
延伸c 68℃ 1Kb/min
末期延伸d 68℃ 5 min 1
Hold 4-10℃
a.需要足够的预变性时间解除抗体封闭；对于高GC含量或复杂二级结构的模板，可以适当延长预变性时间至5～10 min。
b.根据引物与模板的特性，退火温度可在52℃～68℃之间进行调整。
c.扩增速率为1 Kb/min。
d.如需将PCR产物直接用于TA克隆，可将最后的延伸时间设定为20 min。
注意事项:
1.请将需要预混的全部组分配制成PCR混合物后使用，以降低加样误差。
2.使用的PCR仪如无加热盖，推荐在PCR样品上方覆盖少量矿物质油。
3. Taq DNA聚合酶(exo-)的扩增产物在3’端包含dA-overhangs，因此可直接连接到dT/dU-overhang载体上，应用于TA克隆。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！