我们在进行色谱检测的方法开发时,可能会遇到这样的难题:更换了各种型号的色谱柱,尝试了酸性、中性、碱性的流动相,但是目标化合物仍然无法保留在色谱柱中。这些化合物通常极性较大,很容易电离。比如强酸、强碱化合物或某些有机盐等,普通的流动相和色谱柱体系对这类化合物都没有很好的保留效果,这时我们需要祭出一尊大神,有请色谱检测的好帮手——离子对试剂的帮忙了。
离子对试剂是由强亲水离子形成,反作用于样品分子的中性离子对。当添加在流动相中的离子对试剂进入色谱柱后,一侧的烷基链吸附在固定相上,另一侧的可离子化终端吸附带电荷的目标化合物,从而提高色谱柱对样品的保留能力。
尽管可能会对色谱柱造成伤害,但是离子对试剂也有着显而易见的优势:
◆ 可以显著缩短分离时间,获得更好的分离效果;
◆ 缓冲液制备简单;
◆ 碳链长度选择众多,可达到增加保留时间、改善分离性质的效果;
◆ 可有效改善峰型。
离子对试剂的种类和浓度的选择依赖于所需样品的理化性质。若样品是酸性化合物,一般选用四丁基溴化铵(SIT3060)、十二烷基三甲基氯化铵(SID3010)等离子对试剂;若样品是碱性化合物,可以选择戊烷磺酸钠(SIS1100)、己烷磺酸钠(SIS1110)、庚烷磺酸钠(SIS1060)等离子对试剂;对于溶质结构性质相差较大的混合样品,离子对试剂种类的选择则没有特殊要求。同时,在选用离子对试剂时,一般尽可能优先选用碳链短的离子对试剂,浓度尽量的低,这样可以有效避免离子对试剂强保留对色谱柱产生的不可逆影响。
选用离子对色谱分析法固然好处多多,但它的门槛也不低,一些重要的因素需要格外重视,否则将会影响检测的峰型结果乃至仪器、色谱柱的长期使用。
◆尽量专柱专用。大半部分离子对试剂以盐为主,进入色谱柱的离子对试剂很难清洗干净。使用过离子对试剂的色谱柱换到其他流动相使用后重现型较差。一般用过使用离子对试剂的色谱柱都是专用,不建议和其他流动相混用;
◆注意体系重现性。离子对试剂本身没有缓冲能力,对pH敏感,系统中残留的酸和碱都会对体系造成影响;
◆需要长时间平衡。离子对试剂在流动相和色谱柱之间的平衡时间较长,使用之前需要对色谱柱长时间平衡,梯度方法的平衡要求比较高;
◆精准控制用量。在加入离子对试剂时,在保证效果的同时加入量要尽量的少。这是因为在一定范围内,离子对试剂的加入量跟目标样品的保留正相关,由于跟固定相存在作用,所以一旦超过浓度,不仅不会增加目标物的保留,反而会减少。一般长链离子对试剂加入浓度在0.5mmol/L左右,短链离子对试剂加入浓度在5mmol/L左右,可以根据情况适当增加。
索莱宝公司整合全球资源,配以高效严谨的质检水平,重磅推出分析实验周边试剂第二弹——Solarbio离子对试剂系列产品。
◆ 纯度高:所有产品均具有较高纯度;
◆ 适用范围广:针对HPLC、LC/MS,均能提供对应的用于酸性样品和碱性样品分析的产品;
◆ 产品种类丰富:满足色谱分析中绝大多数需要离子对试剂情况的需求。
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