新品早知道|成骨/成脂诱导迷你化合物Kit携手来袭-自主发布-资讯-生物在线

新品早知道|成骨/成脂诱导迷你化合物Kit携手来袭

作者:北京索莱宝科技有限公司 2023-08-23T00:00 (访问量:11959)

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干细胞是一种未充分分化,具有自我复制能力的多潜能细胞,在一定诱导条件下,可以分化为成骨细胞、成软骨细胞和成肌细胞等,还可以分化为巨噬细胞、脂肪细胞、内皮细胞和成纤维细胞等骨髓基质细胞,具有发育为骨、软骨、脂肪、肌肉、真皮及骨髓基质等中胚层组织的潜能。





简言之,干细胞体外定向诱导分化就是选择适当的诱导剂和诱导方法,通过诱导剂与细胞表面受体结合或使细胞发生轻度可逆性损伤等,使被诱导细胞按预定的细胞类型方向分化,然后将这些定向分化的细胞进行分离和培养传代,从而得到人们所需要的细胞类型。一般的,成骨分化和成脂分化是间充质干细胞MSC必要的功能性鉴定指标。成骨分化经茜素红染色法鉴定,成脂分化经油红O染色法鉴定。


Solarbio新增了成骨/成脂诱导迷你化合物Kit,每种Kit均由对应种类经典的可用于诱导的基础试剂、用于鉴定与分析的高品质染料以及相关试剂组成,具有良好的生物活性。客户也可以根据自己的实验需求删减或添加其他的化合物,也可灵活定制专属Kit,所有组分均已经过NMR、HPLCMS检测,以确保化合物纯度和准确性。




产品说明



IK-OIN-1 成骨诱导小分子化合物Kit 

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IK-LIN-1  成脂诱导小分子化合物Kit

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基本操作(仅供参考)



1. 接种骨髓间充质干细胞

取对数生长期的细胞,按照2×104cells/cm2的细胞密度接种至包被后的培养器皿中,于37℃,5% CO2培养环境下培养至相应的融合度(成骨诱导:60~70%;成脂诱导:90~100%),弃掉上清,加入成骨诱导分化培养基(含有地塞米松、维生素C、茜素红等)或成脂诱导分化培养基(含有地塞米松、胰岛素、吲哚美辛和IBMX)。


2. 细胞分化诱导

成骨诱导:每2~3天更换诱导培养基,于37℃,5%CO2培养环境下培养,并注意观察细胞形态变化(一般约14~28天左右)。根据细胞钙盐结晶析出和钙质结节形成的情况,决定终止细胞诱导的时间,进行后续固定和染色鉴定(茜素红染色)。

成脂诱导:于37℃,5%CO2培养环境下培养约2~3天,更换为成脂诱导分化培养基维持液(只含有胰岛素)培养1天。按照以上换液频率继续诱导(一般是3个循环,约14天左右),并注意观察细胞形态变化。根据细胞诱导形成的脂滴数量和大小,决定终止细胞诱导的时间,并进行后续固定和染色鉴定(油红O染色)。


3. 细胞固定

吸去培养基,使用适量1×PBS清洗一次,弃去后取适量4%中性甲醛溶液覆盖培养器皿底面,室温固定30~60 min,弃去固定液再使用1×PBS清洗两次。


4. 染色鉴定

加入适量的染色工作液,染色合适的时间(茜素红:3~5min;油红O:静置染色30min),吸去染液,用1×PBS清洗两次,并加入适量1×PBS避免细胞干燥。


5. 诱导评估与分析

显微镜下观察染色效果,并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时,成骨诱导后的钙质结节会与茜素红染料结合后呈现红色或橘红色。成脂诱导后的脂滴会与油红O染料结合后呈现红色或橘红色。

对于成骨诱导还可以进行半定量分析,上述显微观察结束后,弃上清,加入氯化十六烷基吡啶溶液,室温下孵育15~60min溶解矿化结节(茜素红),然后在562 nm处检测上清的OD值。




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